說起DNA編輯,你會想到CRISPR/Cas9,那RNA編輯呢?今天就帶大家認識一下RNA剪刀手CRISPR/Cas13a。
2017年10月,張鋒實驗室首先證實CRISPR/Casl3a可靶向編輯哺乳動物體內RNA。比起RNAi,Casl3a有著更強的特異性,并且由于其對哺乳動物細胞而言是非內源性的,因此擾亂細胞中天然的轉錄后網絡的可能性極低。大家都知道,Cas9是利用tracrRNA和crRNA來實現與DNA目標的結合和切割。不過,Cas13a(也叫C2c2)只需要24個堿基的crRNA,它通過富含尿嘧啶的莖環結構與Cas13a分子相互作用,并通過Cas13a的一系列構象變化來促進RNA目標的切割。
Cas13a是VI型CRISPR-Cas系統效應蛋白,具有RNA介導的RNA酶切活性能靶向并切割與crRNA互補的RNA,該編輯系統作為一種新興的治療和診斷工具,在病毒性疾病和癌癥等領域受到越來越多的關注。
如何快速有效的實現Cas13a蛋白的定量檢測,作為專業的生命科學醫藥原料供應商,Cell Biolabs中國區金牌代理,艾美捷為您推薦:Cas13a蛋白ELISA檢測試劑盒,實現Cas13a蛋白的定量檢測。
貨號 | PRB-5091 |
名稱 | Cas13a (CRISPR Associated Protein 13a, C2c2) ELISA Kit Cas13a 蛋白ELSIA檢測試劑盒 |
檢測靈敏度 | 沙氏纖毛菌的Cas13a蛋白檢測極限為31pg/mL |
實驗原理 | 本試劑盒用于測量各種細胞和組織裂解液樣本中沙氏纖毛菌的Cas13a蛋白的含量。試劑盒提供包被有抗Cas13a蛋白抗體的96孔板,在使用該試劑盒的測定中,樣品中的Cas13a蛋白牢固且穩定地結合在孔上。然后加入生物素標記的Cas13a蛋白檢測抗體和顯色劑進行識別并顯色。Cas13a的比例與吸光度的強度成比例。Cas13a的絕對量可以通過與Cas13a標準品進行比較來量化。 |
說明書 | 下載 |
Cas13a 蛋白ELSIA檢測試劑盒實驗結果:
圖1. Cas13a標準曲線
圖2. 純化的Cas13a重組蛋白。 泳道 1:SeeBlue Plus2 MW 標準品; 泳道2:重組的Cas13a蛋白。
重組的Cas13a蛋白的序列(下劃線部分是用來免疫生產試劑盒抗體的序列):
MGNLFGHKRWYEVRDKKDFKIKRKVKVKRNYDGNKYILNINENNNKEKIDNNKFIRKYINYKKNDNIL KEFTRKFHAGNILFKLKGKEGIIRIENNDDFLETEEVVLYIEAYGKSEKLKALGITKKKIIDEAIRQG ITKDDKKIEIKRQENEEEIEIDIRDEYTNKTLNDCSIILRIIENDELETKKSIYEIFKNINMSLYKII EKIIENETEKVFENRYYEEHLREKLLKDDKIDVILTNFMEIREKIKSNLEILGFVKFYLNVGGDKKKS KNKKMLVEKILNINVDLTVEDIADFVIKELEFWNITKRIEKVKKVNNEFLEKRRNRTYIKSYVLLDKH EKFKIERENKKDKIVKFFVENIKNNSIKEKIEKILAEFKIDELIKKLEKELKKGNCDTEIFGIFKKHY KVNFDSKKFSKKSDEEKELYKIIYRYLKGRIEKILVNEQKVRLKKMEKIEIEKILNESILSEKILKRV KQYTLEHIMYLGKLRHNDIDMTTVNTDDFSRLHAKEELDLELITFFASTNMELNKIFSRENINNDENI DFFGGDREKNYVLDKKILNSKIKIIRDLDFIDNKNNITNNFIRKFTKIGTNERNRILHAISKERDLQG TQDDYNKVINIIQNLKISDEEVSKALNLDVVFKDKKNIITKINDIKISEENNNDIKYLPSFSKVLPEI LNLYRNNPKNEPFDTIETEKIVLNALIYVNKELYKKLILEDDLEENESKNIFLQELKKTLGNIDEIDE NIIENYYKNAQISASKGNNKAIKKYQKKVIECYIGYLRKNYEELFDFSDFKMNIQEIKKQIKDINDNK TYERITVKTSDKTIVINDDFEYIISIFALLNSNAVINKIRNRFFATSVWLNTSEYQNIIDILDEIMQL NTLRNECITENWNLNLEEFIQKMKEIEKDFDDFKIQTKKEIFNNYYEDIKNNILTEFKDDINGCDVLE KKLEKIVIFDDETKFEIDKKSNILQDEQRKLSNINKKDLKKKVDQYIKDKDQEIKSKILCRIIFNSDF LKKYKKEIDNLIEDMESENENKFQEIYYPKERKNELYIYKKNLFLNIGNPNFDKIYGLISNDIKMADA KFLFNIDGKNIRKNKISEIDAILKNLNDKLNGYSKEYKEKYIKKLKENDDFFAKNIQNKNYKSFEKDY NRVSEYKKIRDLVEFNYLNKIESYLIDINWKLAIQMARFERDMHYIVNGLRELGIIKLSGYNTGISRA YPKRNGSDGFYTTTAYYKFFDEESYKKFEKICYGFGIDLSENSEINKPENESIRNYISHFYIVRNPFA DYSIAEQIDRVSNLLSYSTRYNNSTYASVFEVFKKDVNLDYDELKKKFKLIGNNDILERLMKPKKVSV LELESYNSDYIKNLIIELLTKIENTNDTL
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